microPIV的粒子问题

yxf10

我现在在做microPIV
用的是1um的荧光beads
浓度是0.0175%
按道理浓度是足够的
看不到明显的粒子（这个和电脑显示有关）
但是为什么软件分析的结果也是显示粒子数目很少呢（无法得到正确的流场）

请教一下可能是什么原因？
用的TSI的系统

FlowTech

照片没拍好。比较可能是激光不够亮。
另外就是你的激光足够亮，一幅图像里面的粒子也很少的，不能直接用PIV处理。
一般要很多图像累加成为一幅图像，或者用ensemble correlation来处理。

yxf10

确实是激光的问题
microPIV的光路还真是不好调，一点点偏移都对成像有很大影响
多幅图像如何累加成一幅图像？有没有什么软件推荐？
我用过imageJ里Image caculator的add功能叠加两幅图像，但是叠加完的图像无法导入INSIGHT了，不知道这是什么原因？

FlowTech

不知道有什么软件做累加，我就是弄个程序直接累加指定数量的图像。亮度超过255的像素的处理比较麻烦，处理办法很多。我就是直接饱和掉。
PIV处理软件有时候有一些特殊的文件来记录计算必需的信息， 你把图像累加之后需要自己生成这些文件。或者也有可能ImageJ生成的不是8bit的灰度图像。

yxf10

估计是丢失了信息？
图像格式都是TIFF的
我再试试看

但是现在又碰到粒子显示不出来的问题了
因为从10倍的物镜换到了40倍的物镜
猜测还是因为激光强度的原因
因为明显可以看到从物镜中出来的激光要弱很多
这个有什么办法改进呢？

zyzyeast

激光能量开多大？用的光纤还是液态导光臂？耦合器那里调好了么？

yxf10

能量已经足够高了
既不是用光纤也不是用液态导光臂，用来使大概6年前留下来的两个45度镀膜棱镜再加一个expander将激光导入显微镜光路
耦合器倒是没有调过，不懂这个东西啊

估计也和显微镜的物镜的分辨率等等参数有关系，因为即使看到粒子，也不是很清晰的感觉，图像的质量很不好

zyzyeast

啊？为啥要加expander呢？激光出来的直径大概多大？

用10倍物镜时候清楚么？一般来说40倍物镜数值孔径小，的确不容易调清楚，但是只要工作距离够长就行。另外，你在卤灯下看图像第二张，能清楚么？如果卤灯下都不清楚，激光就更不可能清楚了

yxf10

激光直径只有1mm啊，所以加上了expander才可以到4mm，不然没法照亮整个工作区域的。
10倍还是可以的，但是我要观察的区域很小，细胞直径最大只有16um，大概整个区域在80um*48um左右，10倍不够

zyzyeast

什么激光器只有1mm直径啊？连续的？

卤灯下换40倍能看清么？

spheresci

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